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C18色譜柱從pH指數上面如何進行選擇

發布時間:2022-09-14        閱讀:256
C18色譜柱因鍵合方式的不同、粒徑的不同、長度的不同,內徑的差異等多方面因素,呈現出不同選擇性。這樣,在市場上就出現了數百種具有不同分離選擇特性的C18色譜柱。

對于傳統的C18色譜柱,pH值使用范圍通常為2~7,因為pH值高于8時C18固定相會受到限制。由于殘余硅羥基的存在,易對堿性化合物造成不可逆吸附,造成峰拖尾,影響分離與分析。pH值太低則會使鍵合的烷基脫落,而且對成分的分離達不到要求。

1、酸性條件下C18的選擇

為了改善C18色譜柱在低pH值時的穩定性,有人提出了空間位阻方法。

空間位阻作用是指連接較大基團,立體阻礙溶質基團進攻硅醇基,使硅氧烷能夠再生,提高了化學鍵合固定相抗水解的能力。

還有人制備了側鏈中含有異丙基或異丁基的C18化學鍵合固定相。該固定相由于引入了較大的側鏈基團,立體阻礙了殘留硅醇基與溶質之間的相互作用,在低pH值條件下能夠保持穩定,這種化學鍵合固定相更適合酸性物質的分離。

Zorbax Stable Bond C18色譜柱就使用了空間位阻技術,其使用單官能團硅烷,具有較大的二異丁基(SB-C18)側鏈基團,空間位阻關鍵的硅氧烷鍵合到硅膠表面,以避免在低pH值條件下水解破壞,在酸性流動相條件下提供良好的穩定性和重現性。因此,Stable Bond色譜柱成為低pH值方法開發的很好的選擇。在方法開發初期,若選定流動相為酸性,可將此類色譜柱作為很好的選擇。

2、堿性條件下C18的選擇

制造快速分離堿性化合物的化學鍵合相一直是研究熱點。

雙齒鍵合固定相的每個硅烷化分子中含有兩個硅原子,兩個硅原子之間以-O-或-CH2-CH2等基團連接,每個硅原子含有1個C18官能團。它的環狀結構無論在低pH值條件下,還是高pH值條件下均顯示了較高的穩定性和滿意的柱效。

與傳統的單齒化學鍵合相相比,這種化學鍵合固定相突出的優點是在低、中、高pH值時都有很好的穩定性。使用C18雙齒化學鍵合固定相的商品柱有Zorbax Extend-C18色譜柱,其耐受pH值達11.5,特別適合在高pH值的流動相條件下對強堿性化合物進行有效的色譜分離。
 

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